1.   试品中微生物的回收

表（试验菌液的制备和使用）所列的计数方法适用性试验用的各试验菌应逐一进行微生物的回收试验可采用平皿法、薄膜过滤法或MPN法。

（1）平皿法   平皿法包括倾注法和涂布法。表（试验菌液的制备和使用）中每株试验菌每种培养基至少制备2个平皿，以算术均值作为计数结果。

倾注法   取照上述”供试液的制备“”接种和稀释“和抗菌活性的去除或灭活”制备的供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15~20ml温度不超过45℃熔化的胰酪大豆胨琼脂或沙式葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。若使用直径较大的平皿，培养基的用量应相应增加。按表（试验菌液的制备和使用）规定条件培养、计数。同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。计算各实验组的平均菌落数。

 涂布法   取15~20ml温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂或沙式葡萄糖琼脂培养基，注入直径90mm的无菌平皿，凝固，制成平板，采用适宜的方法使培养基表面干燥。若使用直径较大的平皿，培养基用量也应相应增加。每一平板表面接种上述照“供试液的制备”“接种和稀释”和“抗菌活性的去除或灭活”制备的供试液不少于0.1ml。按表（试验菌液的制备和使用）规定条件培养、计数。同法测定供试品对照组及菌液对照组菌数。计算各试验组的平均菌落数。

（2）薄膜过滤法   薄膜过滤法所采用的滤膜孔径应不大于0.45μm，直径一般为50mm，若采用其他直径的滤膜，冲洗量应进行相应的调整。供试品及其溶剂应不影响滤膜材质对微生物的截留。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过滤前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品，其滤膜和滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量一般为100ml。总冲洗量不得超过1000ml，以避免滤膜上的微生物受损伤。

 取照上述“供试液的制备”接种和稀释“和”抗菌活性的去除或灭活“制备的供试液适量（一般取相当于1g、1ml或10cm²  的供试品,若供试品中所含的菌数较多时,供试液可酌情减量）,加至适量的稀释液中,混匀,过滤.用适量的冲洗液冲洗滤膜.

 若测定需氧菌总数,转移滤膜面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平板上;若测定霉菌和酵母菌总数,转移滤膜菌面朝上贴于沙式葡萄糖琼脂培养基平板上.按表（试验菌液的制备和使用）规定条件培养、计数。每株试验菌每种培养基至少制备一张滤膜。同法测定供试品对照组菌数。

（3）MPN和MPN法的精密度和准确度不及薄膜过滤法和平皿计数法，仅在供试品需氧菌总数没有适宜计数法的情况下使用，本法不使用于霉菌计数。若使用MPN法，按下列步骤进行。

 取照上述供试液的制备”接种和稀释“和”抗菌活性的去除或灭活“制备的供试液至少3个连续稀释级，每一稀释级取3份1ml分别接种至3管装有9~10ml胰酪大豆胨液体培养基中，同法测定菌液对照组菌数。必要时可在培养基中加入表面活性剂、中和剂或灭活剂。

 接种管置30~35℃培养3天，逐日观察各管微生物生长情况。如果由于供试品的原因使得结果难以判断，可将该管培养物转种至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基，在相同条件下培养1~2天，观察是否有微生物生长。根据微生物的管数从下表查被测供试品每1g或每1ml中需氧菌总数的最可能数。